高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建

草业学报 ›› 2011, Vol. 20 ›› Issue (5): 126-132.

高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建

韩明鹏¹,王彦华²,高永革²,张晓霞²,苏芳蕊³,许红¹,王成章^1*

1.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;
2.河南省饲草饲料站,河南郑州 450008;
3.河南农业大学信息与管理科学学院,河南郑州 450002

出版日期:2011-10-20 发布日期:2011-10-20
通讯作者: E-mail:wangchengzhang@263.net
作者简介:韩明鹏(1986-),男,河南南阳人,硕士。
基金资助:
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-35)和国家‘十二五’科技支撑计划项目(2011BAD17B04)资助。

Construction of differently expressed cDNA library of alfalfa by using suppression subtractive hybridization under the high temperature

SU Fang-rui³, XU Hong¹, WANG Cheng-zhang¹

1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;
2.The Forage and Feed Station of Henan Province, Zhengzhou 450008, China;
3.College of Information and Management Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

Online:2011-10-20 Published:2011-10-20

摘要/Abstract

摘要： 为分离和获得紫花苜蓿高温胁迫诱导相关基因片段的EST序列。以秋眠6级的紫花苜蓿品种(ABI 700)为材料,以45℃高温胁迫下的紫花苜蓿幼嫩茎叶cDNA为试验方(tester),以正常生长(22℃)的紫花苜蓿幼嫩茎叶cDNA为驱动方(driver),利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH)构建了高温胁迫下紫花苜蓿幼嫩茎叶的正向抑制消减文库。从消减文库中随机挑取120个阳性克隆,进行菌液PCR鉴定。结果显示,消减文库的滴度为4 230 pfu/mL,重组率为97.8%,插入片段大小主要集中在300~750 bp。本研究为紫花苜蓿抗热基因克隆和系统研究高温胁迫下紫花苜蓿基因的表达奠定了一定的理论基础。

Abstract: In order to isolate the high-temperature stress-induced ESTs from alfalfa, we took the alfalfa variety‘ABI 700’as material whose fall dormancy level was 6, and taking the cDNA from alfalfa tender stems and leaves under 45℃ as tester, while taking their cDNA under 22℃ (normal growth) as driver. The forward suppression subtractive library of alfalfa under high temperature stress was constructed by using suppression subtractive hybridization. Choosing 120 positive clones stochastically from the subtractive library to take bacterial PCR, it displayed the recombination rate of library clones was 97.8%. The size of inserted fragment was mainly between 300-750 bp. This research of the alfalfa differential expression has laid a theoretical basis for the cloning of heat-resistance gene and the gene expression under high temperature.

中图分类号:

韩明鹏,王彦华,高永革,张晓霞,苏芳蕊,许红,王成章. 高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建[J]. 草业学报, 2011, 20(5): 126-132.

SU Fang-rui, XU Hong, WANG Cheng-zhang. Construction of differently expressed cDNA library of alfalfa by using suppression subtractive hybridization under the high temperature[J]. Acta Prataculturae Sinica, 2011, 20(5): 126-132.

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