霸王的原生质体培养及植株再生研究

草业学报 ›› 2009, Vol. 18 ›› Issue (3): 110-116.

霸王的原生质体培养及植株再生研究

王瑛华^1,2,陈刚²,贾敬芬^1*,郝建国¹

1.西北大学生物技术省级重点实验室,陕西西安710069;
2.肇庆学院生命科学学院,广东肇庆 526061

收稿日期:2008-07-15 出版日期:2009-06-20 发布日期:2009-06-20
作者简介:王瑛华(1979-),女,陕西商洛人,讲师,在读博士。E-mail:wangyinghua_118@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(30671082)资助。

Protoplast culture and plant regeneration of Zygophyllum xanthoxylum

WANG Ying-hua^1,2, CHEN Gang², JIA Jing-fen¹, HAO Jian-guo¹

1.Provincial Key Laboratory of Biotechnology, Northwest University, Xi’an 710069, China;

2.Institute of Life Science, Zhaoqing Uiversity, Zhaoqing 526061, China

Received:2008-07-15 Online:2009-06-20 Published:2009-06-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究建立了霸王原生质体再生植株的试验体系。以子叶切块诱导的松软愈伤组织为材料,通过酶法分离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗。比较了不同培养基和培养密度对原生质体分裂和再生的影响。结果表明,原生质体以2×10⁵个/mL的植板密度,采用液体浅层法培养在附加1.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.2 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、0.2 mg/L激动素(KT)、500 mg/L水解酪蛋白(CH)、2%蔗糖和0.5 mol/L甘露醇的DPD培养基中,可获得最佳效果,其细胞分裂频率达28.4%左右。转移到附加1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L萘乙酸(NAA)的MS分化培养基上,获得大量的再生苗。

Abstract: An efficient protocol for plant regeneration from protoplasts of Zygophyllum xanthoxylum was established. The friable calli induced from segments of cotyledon were used for protoplast isolation through enzyme digestion. The effects of different media and plating densities on protoplast divisions and plant regeneration were studied. Sustained cell divisions and colony formation from the protoplasts of Z. xanthoxylum were obtained by a DPD medium containing 1.0 mg/L 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D), 0.2 mg/L 6-benzylaminopurine (6-BA), 0.2 mg/L kinetin (KT), 0.5 mol/L mannitol, 500 mg/L casein hydrolysate, and 2% (W/V) sucrose at a plating density of 2×10⁵ /mL. The division frequency was 28.4%. Regenerated plantlets were obtained when these calli were transferred to MS medium containing 1.0 mg/L 6-BA and 0.5 mg/L (NAA).

中图分类号:

王瑛华,陈刚,贾敬芬,郝建国. 霸王的原生质体培养及植株再生研究[J]. 草业学报, 2009, 18(3): 110-116.

WANG Ying-hua, CHEN Gang, JIA Jing-fen, HAO Jian-guo. Protoplast culture and plant regeneration of Zygophyllum xanthoxylum[J]. Acta Prataculturae Sinica, 2009, 18(3): 110-116.

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志(第43卷, 第一分册)[M[. 北京: 科学出版社, 1998. 140-142.
[2]吴彩霞, 周志宇, 庄光辉, 等. 强旱生植物霸王和红砂地上部营养物质含量及其季节动态[J[. 草业科学, 2004, 21(3): 30-34.
[3]杨鑫光, 傅华, 张洪荣, 等. 水分胁迫对霸王苗期叶水势和生物量的影响[J[. 草业学报, 2006, 15(2): 37-41.
[4]曾彦军, 王彦荣, 保平, 等. 几种生态因子对红砂和霸王种子萌发与幼苗生长的影响[J[. 草业学报, 2005, 14(5): 24-31.
[5]周向睿, 周志宇, 吴彩霞. 霸王繁殖特性的研究[J[. 草业科学, 2006, 23(6): 38-41.
[6]张志勇, 胡相伟. 霸王的组织培养和植株再生[J[. 植物生理学通讯, 2007, 43(3): 495.
[7]伍国强, 席杰军, 周向睿, 等. 一种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总RNA提取方法[J[. 分子植物育种, 2008, 6(1): 197-200.
[8]宛涛, 燕玲, 史雪松, 等. 内蒙古驼蹄瓣属植物与其近缘种霸王遗传多样性的比较研究[J[. 干旱区资源与环境, 2006, 20(4): 200-203.
[9]郝瑞文, 景建洲, 李振勇, 等. 霸王基因组RAPD优化条件的建立[J[. 中国沙漠, 2006, 26(2): 286-290.
[10]吴金霞, 陈彦龙, 何近刚, 等. 生物技术在牧草品质改良中的应用[J[. 草业学报, 2007, 16(2): 1-9.
[11]谷俊涛, 赵红梅, 刘祝玲, 等. 农杆菌介导白三叶草高效遗传转化和转基因植株再生[J[. 草业学报, 2007, 16(2): 84-89.
[12]舒庆艳, 徐夙侠, 金治平, 等. mRNA差异显示技术分离羊草基因体外培养过程中特定基因及特性分析[J[. 草业学报, 2007, 16(5): 113-120.
[13]张改娜, 王瑛华, 王学仁, 等. 鹰嘴紫云英甲硫氨酸抗性系原生质体培养及植株再生[J[. 分子细胞生物学报, 2006, 39(3): 191-198.
[14]金红, 贾敬芬, 郝建国. 草木樨状黄芪甲硫氨酸抗性系的原生质体培养及植株再生[J[. 生物工程学报, 2004, 20(2): 221-226.
[15]赵宏波, 陈发棣. 植物体细胞原生质体遗传转化研究[J[. 西北植物学报, 2004, 24(7): 1329-1341.
[16]郝瑞文. 农杆菌介导番茄和牛膝的遗传转化及霸王组培再生[D[. 西安:西北大学硕士学位论文, 2005.
[17]Murashige T, Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture[J[. Physiologia Plantarum, 1962, 15: 473-497.
[18]Durand J, Potrykus I, Donn G. Plantes rissue de protoplasts de petunia[J[. Z. Pflanzenphysiol, 1973, 69: 26-34.
[19]Gamborg O L, Miller R A, Ojima K. Nutrient requirement for growth of vicia hajastana cells and protoplasts at very low population density in liquid media[J[. Planta, 1975, 126: 105-110.
[20]许智宏, 卫志明. 植物原生质体培养和遗传操作[M[. 上海: 上海科学技术出版社, 1997. 11-13.
[21]孙勇如, 安锡培. 植物原生质体培养[M[. 北京: 科学出版社, 1991. 53-55.
[22]孙敬三, 朱至清. 植物细胞工程[M[. 北京: 化学工业出版社, 2006. 38.
[23]Witjaksono R E L, Grosser J W. Isolation, culture and regeneration of avocado (Persea americana Mill.) protoplasts[J[. Plant Cell Reports, 1998, 18: 235-242.
[24]Navratilova B. Protoplast cultures and protoplast fusion focused on Brassicaceae——a review[J[. Horticultural Science, 2004, 31(4): 140-157.
[25]姜淑慧, 管荣展, 董海滨, 等. 播娘蒿愈伤组织原生质体培养体系的研究[J[. 草业学报, 2006, 15(4): 94-98.