通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T0代植株及其RAPD验证

草业学报 ›› 2011, Vol. 20 ›› Issue (3): 292-297.

通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T₀代植株及其RAPD验证

张立全,牛一丁,郝金凤,哈斯阿古拉^*

内蒙古大学生命科学学院内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室,内蒙古呼和浩特　010021

收稿日期:2010-05-10 出版日期:2011-03-25 发布日期:2011-06-20
通讯作者: E-mail:hasind@sina.com
作者简介:张立全(1978-),男,内蒙古锡盟人,实验师,在读博士。E-mail:zhangliquan430@sohu.com
基金资助:
国家科技支撑计划子课题(2008BADB3B01-02),内蒙古自然科学基金项目(200607010503)和内蒙古大学“513人才计划”科研项目资助。

Production and RAPD verification of T₀ salt-tolerant alfalfa introducing the total DNA from Rhizophora apiculata by the pollen-tube pathway

ZHANG Li-quan, NIU Yi-ding, HAO Jin-feng, HASI Agula

College of Life Sciences, Inner Mongolia University, Inner Mongolia Key Laboratory of Herbage & Endemic Crop Biotechnology, Hohhot 010021, China

Received:2010-05-10 Online:2011-03-25 Published:2011-06-20

摘要/Abstract

摘要： 利用花粉管通道法将盐生植物红树总DNA导入紫花苜蓿,共导入1 391朵花,获得894粒T₀代转化种子。T₀代种子种植在含有225 mmol/L NaCl的MS培养基上,获得12株耐盐性强的植株。以供体和受体为对照,对12株耐盐植株进行RAPD分析,在55条随机引物中有8条扩增出稳定、清晰的条带,条带的差异性表现为新增条带、供体特异条带和受体条带丢失。以上结果初步证实外源DNA已经整合到受体的基因组中,而且T₀代植株耐盐能力提高可能与外源基因的导入有关。

Abstract: The exogenous total DNA of Rhizophora apiculata was introduced into alfalfa (Medicago sativa) by the pollen-tube pathway. In this study, 1 391 flowers were treated and 894 transformed T₀ seeds were harvested. Twelve T₀ seedlings with improved salt-tolerance were obtained when the T₀ seeds were planted in MS medium containing 225 mmol/L NaCl. RAPD analysis of T₀ seedlings, receptor and donor were carried out. Eight primers which could amplify steady and clear bands were chosen from 55 arbitrary primers tested, and increased band diversity with new bands, specific bands in donor and deletion in receptor. It showed that the exogenous DNA was conformed for integration into the receptors genome, and the improved salt-resistance of T₀ seedlings may be related to the introduction of exogenous genes.

中图分类号:

张立全,牛一丁,郝金凤,哈斯阿古拉. 通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T₀代植株及其RAPD验证[J]. 草业学报, 2011, 20(3): 292-297.

ZHANG Li-quan, NIU Yi-ding, HAO Jin-feng, HASI Agula. Production and RAPD verification of T₀ salt-tolerant alfalfa introducing the total DNA from Rhizophora apiculata by the pollen-tube pathway[J]. Acta Prataculturae Sinica, 2011, 20(3): 292-297.

参考文献

[1] 赵可夫, 李法曾. 中国盐生植物[M]. 北京: 科学出版社, 1999.
[2] 崔润丽, 刁现民. 植物耐盐相关基因克隆与转化研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(8): 25-29.
[3] Mccuc K F, Hanson A D. Drought and salt tolerance: Towards understanding and application[J].Trends in Biotechnology, 2000, 8: 358-362.
[4] Zhou G Y, Weng J, Zeng Y, et al. Introduction of exogenous DNA into cotton embryos[J]. Methods in Enzymology, 1983, 101: 433-481.
[5] 林栖凤, 方清, 邓用川, 等. 耐盐番茄分子育种研究[J]. 生命的化学, 2004, 24: 35-37.
[6] 林栖凤, 邓用川, 李冠一, 等. 外源DNA导入豇豆提高耐盐能力的研究[J]. 生物化学杂志, 1997, 10: 454-455.
[7] 林栖凤, 邓用川, 李冠一, 等. 红树DNA导入茄子获得耐盐性后代的研究[J]. 生物工程进展, 2001, 21(5): 40-44.
[8] 林栖凤, 邓用川, 吴多桂, 等. 耐盐辣椒分子育种[J]. 生物工程进展, 1999, 19(5): 19-24.
[9] 肖军, 张立军, 任志莹, 等. 通过花粉管通道导入外源DNA 获得抗盐番茄新品系[J]. 沈阳农业大学学报, 2008, 39(3): 362-364.
[10] 耿华珠, 吴永敷, 曹致中, 等. 中国苜蓿(第一版)[M]. 北京: 中国农业出版社, 1995.
[11] 马春晖, 夏艳军, 韩军, 等. 不同青贮添加剂对紫花苜蓿青贮品质的影响[J]. 草业学报, 2010, 19(1): 128-133.
[12] 刘青芳, 步怀宇, 赵宇玮, 等. 紫花苜蓿离体培养植株再生及其RAPD 分析[J]. 草业学报, 2006, 15(5): 115-121.
[13] 张改娜, 贾敬芬. 豌豆清蛋白1(AP1)基因的克隆及对苜蓿的转化[J]. 草业学报, 2009, 18(3): 117-125.
[14] Winicov I, Bastola D R. Transgenic overexpression of the transcription factor Alfin1 enhances expression of the endogenous MsPRP2 gene in Alfalfa and improves salinity tolerance of the plants[J]. Plant Physiology, 1999, 120: 473-480.
[15] 燕丽萍, 夏阳, 梁慧敏, 等. 转BADH基因苜蓿T₁代遗传稳定性和抗盐性研究[J]. 草业学报, 2009, 18(6): 65-71.
[16] 吴多桂, 林栖凤, 李冠一. 红树DNA 的CTAB 法提取及其RAPD反应[J]. 中国生物化学及分子生物学报, 1999, 15(1): 67-70.
[17] 王关林, 方宏筠. 植物基因工程(第二版)[M]. 北京: 科学出版社, 2002.
[18] Atienzar F A, Jha A N. The random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay and related techniques applied to genotoxicity and carcinogenesis studies: A critical review[J]. Mutation Research, 2006, 613: 76-102.
[19] 王松文, 赵炳然, 邢全华, 等. 野生稻 DNA 片段存在于高世代水稻变异系进一步的分子验证[J]. 中国农业科学, 2006, 39(11): 2170-2177.
[20] 李希臣, 雷勃钧, 卢翠华, 等.早熟大豆外源DNA导入的RAPD分子验证[J]. 大豆科学, 1994, 13(2): 152-156.

通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T₀代植株及其RAPD验证

Production and RAPD verification of T₀ salt-tolerant alfalfa introducing the total DNA from Rhizophora apiculata by the pollen-tube pathway

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[13]	刘义,张春梅,谢晓蓉,闫芳,胡丹. 干旱胁迫对紫花苜蓿叶片和根系多胺代谢的影响[J]. 草业学报, 2012, 21(6): 102-107.
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[15]	李燕,孙彦,杨青川,康俊梅,张铁军,房锋. 紫花苜蓿MsZIP基因超表达载体的构建及转基因苜蓿检测[J]. 草业学报, 2012, 21(6): 182-189.