内源异黄酮对紫花苜蓿结瘤固氮及氮效率的调控研究

doi:10.11686/cyxb2021011

摘要/Abstract

摘要：

为探究紫花苜蓿体内异黄酮与结瘤固氮及氮效率的关系，以紫花苜蓿品种中氮高效的“LW6010”和氮低效的陇东苜蓿为材料，采用室内营养液砂培，设5个氮素水平，研究了不同氮效率紫花苜蓿的异黄酮含量和固氮特性以及异黄酮合酶（IFS）和结瘤信号传递通路基因（nod）的表达。结果表明：紫花苜蓿的异黄酮含量与根瘤数、单株总根瘤重以及单株固氮潜力的相关性显著，并且在低氮胁迫时紫花苜蓿的异黄酮含量以及根瘤数、单株总根瘤重和单株固氮潜力均显著上升。另外，还发现：氮高效的“LW6010”紫花苜蓿在氮胁迫时，茎叶和根系中上调的IFS基因数量和上调幅度均大于氮低效的陇东苜蓿，因此促进了nod基因的高表达，最终提高了氮效率。综上所述，1）紫花苜蓿的结瘤固氮与异黄酮含量显著正相关，在外源氮素浓度改变时，紫花苜蓿能通过茎叶和根系中不同IFS基因的表达提高体内异黄酮含量，从而刺激nod基因表达来促进结瘤和提高单株固氮潜力；2）紫花苜蓿体内异黄酮含量的差异是决定其氮效率高低的重要原因，氮高效紫花苜蓿在氮胁迫时通过多个IFS基因的高表达促进异黄酮合成，进而刺激结瘤固氮，从而表现出氮高效。

关键词: 异黄酮, 紫花苜蓿, 结瘤固氮, 氮效率, 调控

Abstract:

This research compared alfalfa varieties “LW6010” with high nitrogen absorption and utilization efficiency and “Longdong” with low nitrogen absorption and utilization efficiency， in order to investigate the relationship between isoflavone concentrations and nodulation， nitrogen fixation and nitrogen use efficiency in alfalfa. The isoflavone concentrations and nitrogen fixation characteristics， together with the expression of isoflavone synthase （IFS） and nodulation signaling pathway （nod） genes of the two alfalfa varieties with contrasting nitrogen use efficiencies were studied at five different nitrogen levels. It was found that the isoflavone content of alfalfa was significantly correlated with the number of nodules， the total nodule weight per plant， the whole plant nitrogen-fixing potential. At lower nitrogen levels， the isoflavone content and nodule number， total nodule weight per plant and nitrogen fixation potential of alfalfa all showed a significant increase. Under nitrogen deficit or over-supply stress， the number of upregulated IFS genes and magnitude of up-regulation in the stems， leaves and roots of the nitrogen-efficient LW6010 variety were greater than those of the nitrogen-inefficient Longdong alfalfa variety， thus promoting high expression of the nod genes and， ultimately， improved nitrogen use efficiency. Therefore， 1） The nodulation and nitrogen fixation of alfalfa is significantly positively correlated with the isoflavone content. When the concentration of exogenous nitrogen decreases， alfalfa is able to increase the isoflavone content in the plant tissues through the expression of different IFS genes in the stems， leaves and roots， thereby stimulating the expression of nod genes to promote nodulation and increase the plant nitrogen fixation potential； 2） The difference in isoflavone content in alfalfa is an important physiological determinant of its nitrogen efficiency. Nitrogen-efficient alfalfa promotes isoflavone synthesis through the high expression of multiple IFS genes under nitrogen stress， thereby stimulating nodulation and nitrogen fixation， thus achieving high nitrogen absorption and nitrogen use efficiency.

Key words: isoflavones, alfalfa, nodulation and nitrogen fixation, nitrogen efficiency, regulation

童长春, 刘晓静, 吴勇, 赵雅姣, 王静. 内源异黄酮对紫花苜蓿结瘤固氮及氮效率的调控研究[J]. 草业学报, 2022, 31(3): 124-135.

Chang-chun TONG, Xiao-jing LIU, Yong WU, Ya-jiao ZHAO, Jing WANG. Regulation of endogenous isoflavones on alfalfa nodulation and nitrogen fixation and nitrogen use efficiency[J]. Acta Prataculturae Sinica, 2022, 31(3): 124-135.

图/表 11

参考文献 42

1	Zhang C， Wang Y F， Chen J， et al. Research advances on the regulation of secondary metabolism by plant MYB transcription factors. Genomics and Applied Biology， 2020， 39（9）： 4171-4177.
	张驰，王艳芳，陈静，等. 植物MYB转录因子调控次生代谢的研究进展. 基因组学与应用生物学， 2020， 39（9）： 4171-4177.
2	Guo C H， Zhu X F， Duan Y X， et al. Suppression of different soybean isoflavones on Heterodera glycines. Chinese Journal of Oil Crop Sciences， 2017， 39（4）： 540-545.
	郭春红，朱晓峰，段玉玺，等. 抑制大豆胞囊线虫的异黄酮种类研究. 中国油料作物学报， 2017， 39（4）： 540-545.
3	Yu A L， Zhao J F， Cheng K， et al. Screening and analysis of key metabolic pathways in foxtail millet during different water uptake phases of germination. Scientia Agricultura Sinica， 2020， 53（15）： 3005-3019.
	余爱丽，赵晋锋，成锴，等. 谷子萌发吸水期关键代谢途径的筛选与分析. 中国农业科学， 2020， 53（15）： 3005-3019.
4	Yu Y， Liu J， Deng B， et al. Effects of exogenous root exudates on symbiosis of alfalfa and rhizobium. Acta Agrestia Sinica， 2020， 28（1）： 88-94.
	于跃，刘静，邓波，等. 外源根系分泌物对紫花苜蓿根瘤菌共生体系的影响. 草地学报， 2020， 28（1）： 88-94.
5	Zhang J， Subramanian S， Stacey G， et al. Flavones and flavonols play distinct critical roles during nodulation of Medicago truncatula by Sinorhizobium meliloti. Plant Journal， 2010， 57（1）： 171-183.
6	Wasson A P， Pellerone F I， Mathesius U. Silencing the flavonoid pathway in Medicago truncatula inhibits root nodule formation and prevents auxin transport regulation by rhizobia. Plant Cell， 2006， 18（7）： 1617-1629.
7	Kuang Y， Li T X， Yu H Y. Effect of nitrogen on protective enzyme activities and lipid peroxidation in triticale genotypes with different N use efficiency. Acta Prataculturae Sinica， 2011， 20（6）： 93-100.
	匡艺，李廷轩，余海英. 氮素对不同氮效率小黑麦基因型叶片保护酶活性和膜脂过氧化的影响. 草业学报， 2011， 20（6）： 93-100.
8	Chen C， Gong H Q， Zhang J Z， et al. Evaluation of nitrogen nutrition characteristics of different rice cultivars at seedling stage. Chinese Journal of Eco-Agriculture， 2016， 24（10）： 1347-1355.
	陈晨，龚海青，张敬智，等. 不同基因型水稻苗期氮营养特性差异及综合评价. 中国生态农业学报， 2016， 24（10）： 1347-1355.
9	Feng Y， Chen H F， Hu X M， et al. Nitrogen efficiency screening of rice cultivars popularized in south China. Journal of Plant Nutrition and Fertilizers， 2014， 20（5）： 1051-1062.
	冯洋，陈海飞，胡孝明，等. 我国南方主推水稻品种氮效率筛选及评价. 植物营养与肥料学报， 2014， 20（5）： 1051-1062.
10	Liu X J， Ye F， Zhang X L. Effects of exogenous nitrogen forms on root characteristics of alfalfa at different growth stages. Acta Prataculturae Sinica， 2015， 24（6）： 53-63.
	刘晓静，叶芳，张晓玲. 外源氮素形态对紫花苜蓿不同生育期根系特性的影响. 草业学报， 2015， 24（6）： 53-63.
11	Wang C X， Ling F， Lu Z Q， et al. Characteristics of nitrogen accumulation and utilization in peanuts （Arachis hypogaea） with different nitrogen use efficiencies. Chinese Journal of Eco-Agriculture， 2019， 27（11）： 1706-1713.
	王春晓，凌飞，鹿泽启，等. 不同氮效率花生品种氮素累积与利用特征. 中国生态农业学报， 2019， 27（11）： 1706-1713.
12	Hu W， Zhang Y H， Li P， et al. Effects of water and nitrogen supply under drip irrigation on the production performance rate and water and nitrogen use efficiency of alfalfa. Acta Prataculturae Sinica， 2019， 28（2）： 41-50.
	胡伟，张亚红，李鹏，等. 水氮供应对地下滴灌紫花苜蓿生产性能及水氮利用效率的影响. 草业学报， 2019， 28（2）： 41-50.
13	Nan L L， Shi S L， Guo Q E， et al. Effects of seeding rate and row spacing on nutritional value of alfalfa in the arid oasis region of Gansu Province. Acta Prataculturae Sinica， 2019， 28（1）： 108-119.
	南丽丽，师尚礼，郭全恩，等. 甘肃荒漠灌区播量和行距对紫花苜蓿营养价值的影响. 草业学报， 2019， 28（1）： 108-119.
14	Qi P， Liu X J， Liu Y N， et al. Effect of nitrogen fertilizer on nitrogen accumulation in alfalfa and the content of nitrogen in soil. Acta Agrestia Sinica， 2015， 23（5）： 1026-1032.
	齐鹏，刘晓静，刘艳楠，等. 施氮对不同紫花苜蓿品种氮积累及土壤氮动态变化的影响. 草地学报， 2015， 23（5）： 1026-1032.
15	Liu X J， Liu Y N， Kuai J L， et al. Effects of different N levels on productivity and quality of alfalfa varieties. Acta Agrestia Sinica， 2013， 21（4）： 702-707.
	刘晓静，刘艳楠，蒯佳林，等. 供氮水平对不同紫花苜蓿产量及品质的影响. 草地学报， 2013， 21（4）： 702-707.
16	Fang X L， Zhang C X， Nan Z B. Research advances in Fusarium root rot of alfalfa （Medicago sativa）. Acta Prataculturae Sinica， 2019， 28（12）： 169-183.
	方香玲，张彩霞，南志标. 紫花苜蓿镰刀菌根腐病研究进展. 草业学报， 2019， 28（12）： 169-183.
17	Subramanian S， Stacey G， Yu O. Distinct， crucial roles of flavonoids during legume nodulation. Trends in Plant Science， 2007， 12（7）： 282-285.
18	Hao F. Study on nitrogen efficiency mechanism and division growth period by nitrogen nutrition stage of alfalfa. Lanzhou： Gansu Agricultural University， 2017.
	郝凤. 紫花苜蓿氮效率差异机制与氮营养阶段生育期划分的研究. 兰州：甘肃农业大学， 2017.
19	Zhang X L， Liu X J， Hao F. Response of leaf conducting tissue anatomy and photosynthetic characteristics of alfalfa to exogenous nitrogen. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica， 2015， 35（8）： 1597-1603.
	张晓玲，刘晓静，郝凤. 紫花苜蓿叶输导组织解剖结构和光合特性对外源氮的响应. 西北植物学报， 2015， 35（8）： 1597-1603.
20	Hoagland D R， Arnon D I. The water culture method for growing plants without soil. California Agricultural Experiment Station Circular， 1950， 347： 139.
21	Hu F L， Zhao C， Feng F X， et al. Improving N management through intercropping alleviates the inhibitory effect of mineral N on nodulation in pea. Plant and Soil， 2017， 412（1/2）： 235-251.
22	Xia X， Ma C， Dong S， et al. Effects of nitrogen concentrations on nodulation and nitrogenase activity in dual root systems of soybean plants. Soil Science and Plant Nutrition， 2017， 63（5）： 470-482.
23	Lu R K. Chemical analysis of soil agriculture. Beijing： China Agricultural Science and Technology Press， 2000.
	鲁如坤. 土壤农业化学分析方法. 北京：中国农业科技出版社， 2000.
24	Livak K J， Schmittgcn T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2^-△△^Ct method. Methods， 2001， 25（4）： 402-408.
25	Yang Q， Wang Y X， Li X X， et al. Isolation and screening of effective rhizobial strains of cassia （Chamaecrista spp.） pasture in acidic soils. Acta Agrestia Sinica， 2020， 28（6）： 1519-1526.
	杨庆，王义祥，李欣欣，等. 酸性土壤中决明属牧草高效根瘤菌的分离及筛选. 草地学报， 2020， 28（6）： 1519-1526.
26	Fan Y T， Fan R N， Zhang H， et al. Biosynthesis and function of flavonol in plants： A review. Chinese Agricultural Science Bulletin， 2020， 36（33）： 95-101.
	范雁婷，樊若楠，张辉，等. 植物黄酮醇生物合成及功能研究进展. 中国农学通报， 2020， 36（33）： 95-101.
27	Zhu Y， Chu S S， Zhang P P， et al. An R2R3-MYB transcription factor GmMYB184 regulates soybean isoflavone synthesis. Acta Agronomica Sinica， 2018， 44（2）： 185-196.
	朱莹，褚姗姗，张培培，等. R2R3-MYB转录因子GmMYB184调节大豆异黄酮合成. 作物学报， 2018， 44（2）： 185-196.
28	Zhang X N， Piao C L， Dong Y K， et al. Transcriptome analysis of response to heavy metal Cd stress in soybean root. Chinese Journal of Applied Ecology， 2017， 28（5）： 1633-1641.
	张晓娜，朴春兰，董友魁，等. 大豆根系应答重金属Cd胁迫的转录组分析. 应用生态学报， 2017， 28（5）： 1633-1641.
29	Wan Q， Liu X Q， Zhang D Y， et al. Cloning and expression of GmNAC73-like gene from Glycine max and its effect on GmIFS2 gene. Journal of Plant Resources and Environment， 2016， 25（3）： 12-18， 27.
	万群，刘晓庆，张大勇，等. 大豆GmNAC73-like基因的克隆和表达及其对GmIFS2基因的影响. 植物资源与环境学报， 2016， 25（3）： 12-18， 27.
30	Velde W V， Guerra J C， Keyser A D， et al. Aging in legume symbiosis.A molecular view on nodule senescence in Medicago truncatula. Plant Physiolohy， 2006， 141（2）： 711-720.
31	Catoira R， Galera C， Billy F D， et al. Four genes of Medicago truncatula controlling components of a nod factor transduction pathway. The Plant Cell， 2000， 12（9）： 1647-1665.
32	Wu L K， Lin X M， Lin W X. Advances and perspective in research on plant-soil-microbe interactions mediated by root exudates. Chinese Journal of Plant Ecology， 2014， 38（3）： 298-310.
	吴林坤，林向民，林文雄. 根系分泌物介导下植物-土壤-微生物互作关系研究进展与展望. 植物生态学报， 2014， 38（3）： 298-310.
33	Subramanian S， Stacey G， Yu O. Endogenous isoflavones are essential for the establishment of symbiosis between soybean and Bradyrhizobium japonicum. Plant Journal， 2010， 48（2）： 261-273.
34	Wu Y W， Li Q， Dou P， et al. Effects of nitrogen fertilizer on leaf chlorophyll content and enzyme activity at late growth stages in maize cultivars with contrasting tolerance to low nitrogen. Acta Prataculturae Sinica， 2017， 26（10）： 188-197.
	吴雅薇，李强，豆攀，等. 氮肥对不同耐低氮性玉米品种生育后期叶绿素含量和氮代谢酶活性的影响. 草业学报， 2017， 26（10）： 188-197.
35	Ji L， Yang H， Li T X， et al. Dry matter production and nitrogen accumulation of rice genotypes with different nitrogen use efficiencies. Acta Prataculturae Sinica， 2014， 23（6）： 327-335.
	戢林，杨欢，李廷轩，等. 氮高效利用基因型水稻干物质生产和氮素积累特性. 草业学报， 2014， 23（6）： 327-335.
36	Li K， Guo Y Q， Liu C N， et al. Effects of different NH₄⁺/NO₃^- ratios on soybean growth， nodulation and biological N fixation. Chinese Journal of Oil Crop Sciences， 2014， 36（3）： 349-356.
	李凯，郭宇琦，刘楚楠，等. 铵硝配比对大豆生长及结瘤固氮的影响. 中国油料作物学报， 2014， 36（3）： 349-356.
37	Song B， Li P Y， Wang P W， et al. Analysis of soybean isoflavones content and its components in different soybeans. Soybean Science， 2008， 27（4）： 675-678.
	宋冰，李鹏月，王丕武，等. 大豆异黄酮的品种间差异分析. 大豆科学， 2008， 27（4）： 675-678.
38	Zhou X H， Tian F， Du L P， et al. Advances in molecular biology research of interaction between plants and beneficial microorganisms and their applications in plant improvement. Scientia Agricultura Sinica， 2012， 45（14）： 2801-2814.
	周晓鸿，田芳，杜丽璞，等. 植物与有益微生物互作的分子基础及其应用的研究进展. 中国农业科学， 2012， 45（14）： 2801-2814.
39	Cooper J E. Early interactions between legumes and rhizobia： Disclosing complexity in a molecular dialogue. Journal of Applied Microbiology， 2007， 103（5）： 1355-1365.
40	Sugiyama A， Yamazaki Y， Yamashita K， et al. Developmental and nutritional regulation of isoflavone secretion from soybean roots. Bioscience， Biotechnology， and Biochemistry， 2016， 80（1）： 89-94.
41	An Q， Yin B， Zhang J C， et al. The chemotaxis and nodulation effect of soybean rhizobium on exogenous flavonoids. Soybean Science， 2017， 36（6）： 900-904.
	安琦，殷博，张介驰，等. 外源类黄酮对大豆根瘤菌趋化性与结瘤效果的影响. 大豆科学， 2017， 36（6）： 900-904.
42	Liu Y C， Xiao J X， Tang L， et al. Effect of nitrogen application rate on root soy isoflavone exudate of wheat/faba bean intercropping system. Chinese Journal of Eco-Agriculture， 2018， 26（6）： 799-806.
	刘英超，肖靖秀，汤利，等. 施氮量对间作小麦蚕豆根系分泌大豆异黄酮的影响. 中国生态农业学报， 2018， 26（6）： 799-806.

基因名称Gene name	登录号Accession No.	引物序列Primers sequences （5′-3′）
IFS-1	MTR_5g020760	F： 5′-CACGAGGCAGTTGAGCCAGTTAG-3′
IFS-1	MTR_5g020760	R： 5′-ACGTCGAGTTGAGCCAAGTTACG-3′
IFS-2	MTR_5g020800	F： 5′-CACGAGGCAGTTGAGCCAGTTAG-3′
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IFS-3	MTR_8g071130	F： 5′-ATGGTTGTTCACGAGACCTCAGTG-3′
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IFS-4	MTR_4g070340	F： 5′-TCGATGTTTCAGTGTCCGTGT-3′
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18S	KJ 507198.1	F： 5′- AAAGGAATTGACGGAAGGGC-3′
18S	KJ 507198.1	R： 5′- CGCTCCACCAACTAAGAACG-3′

基因名称Gene name	登录号Accession No.	引物序列Primers sequences （5′-3′）
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IFS-4	MTR_4g070340	F： 5′-TCGATGTTTCAGTGTCCGTGT-3′
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部位 Position	品种 Varieties	处理 Treatments	木犀草素 Luteolin	染料木素 Genistein	大豆苷元 Daidzein	刺芒柄花素 Formononetin	总含量 Total content
茎叶 Stem and leaf	LW6010	N₂₁	2.56±0.28a	26.37±1.07a	29.73±1.52a	2.72±0.38a	61.37±2.48a
		N₁₀₅	2.48±0.05a	22.17±0.68b	23.61±0.72b	2.67±0.08a	50.93±0.08b
		N₂₁₀	1.01±0.04d	18.90±0.56c	18.67±1.21c	1.66±0.12cd	40.24±1.05d
		N₃₁₅	1.08±0.06d	21.00±0.42b	22.26±1.21b	2.12±0.08bc	46.45±1.56c
		N₄₂₀	2.91±0.20a	27.58±0.63a	25.03±1.29b	2.92±0.10a	58.43±1.16a
	陇东苜蓿 Longdong	N₂₁	1.60±0.08bc	16.80±0.40d	12.13±0.84de	1.62±0.07d	32.15±1.18e
		N₁₀₅	1.14±0.06cd	14.70±0.81e	10.97±0.84de	1.69±0.04cd	28.50±1.04ef
		N₂₁₀	1.02±0.21d	16.93±0.46d	9.10±0.91e	2.19±0.08b	29.24±1.59ef
		N₃₁₅	1.47±0.12bcd	12.60±0.84f	9.10±0.62e	1.98±0.11bcd	25.15±1.54f
		N₄₂₀	1.84±0.18b	10.27±0.24g	13.18±1.04d	1.69±0.04cd	26.99±1.21f
根系 Root	LW6010	N₂₁	5.90±0.19a	41.28±0.98a	40.98±0.78a	4.28±0.10a	92.43±2.11a
		N₁₀₅	3.83±0.16c	28.82±1.04c	24.15±0.61c	3.29±0.09b	60.09±1.40c
		N₂₁₀	1.93±0.12e	26.09±1.21d	19.97±0.75d	2.45±0.06d	50.45±3.24d
		N₃₁₅	2.50±0.10d	25.78±0.51d	21.48±0.64d	2.73±0.02c	52.49±2.06d
		N₄₂₀	4.43±0.23b	35.85±0.46b	28.28±0.91b	4.08±0.08a	72.65±1.19b
	陇东苜蓿 Longdong	N₂₁	1.92±0.04e	20.16±0.48e	14.56±1.01ef	1.89±0.09ef	38.53±2.59e
		N₁₀₅	1.19±0.29f	17.64±0.39f	13.16±0.48fg	1.71±0.11f	33.70±1.51f
		N₂₁₀	1.22±0.03f	21.25±1.10e	10.92±0.69g	1.67±0.03f	35.06±3.05ef
		N₃₁₅	1.76±0.09e	12.60±0.48g	10.92±0.84g	2.12±0.09e	27.41±0.96g
		N₄₂₀	2.21±0.02de	14.31±0.63g	15.82±0.29e	2.41±0.06d	34.75±1.51f

部位 Position	品种 Varieties	处理 Treatments	木犀草素 Luteolin	染料木素 Genistein	大豆苷元 Daidzein	刺芒柄花素 Formononetin	总含量 Total content
茎叶 Stem and leaf	LW6010	N₂₁	2.56±0.28a	26.37±1.07a	29.73±1.52a	2.72±0.38a	61.37±2.48a
		N₁₀₅	2.48±0.05a	22.17±0.68b	23.61±0.72b	2.67±0.08a	50.93±0.08b
		N₂₁₀	1.01±0.04d	18.90±0.56c	18.67±1.21c	1.66±0.12cd	40.24±1.05d
		N₃₁₅	1.08±0.06d	21.00±0.42b	22.26±1.21b	2.12±0.08bc	46.45±1.56c
		N₄₂₀	2.91±0.20a	27.58±0.63a	25.03±1.29b	2.92±0.10a	58.43±1.16a
	陇东苜蓿 Longdong	N₂₁	1.60±0.08bc	16.80±0.40d	12.13±0.84de	1.62±0.07d	32.15±1.18e
		N₁₀₅	1.14±0.06cd	14.70±0.81e	10.97±0.84de	1.69±0.04cd	28.50±1.04ef
		N₂₁₀	1.02±0.21d	16.93±0.46d	9.10±0.91e	2.19±0.08b	29.24±1.59ef
		N₃₁₅	1.47±0.12bcd	12.60±0.84f	9.10±0.62e	1.98±0.11bcd	25.15±1.54f
		N₄₂₀	1.84±0.18b	10.27±0.24g	13.18±1.04d	1.69±0.04cd	26.99±1.21f
根系 Root	LW6010	N₂₁	5.90±0.19a	41.28±0.98a	40.98±0.78a	4.28±0.10a	92.43±2.11a
		N₁₀₅	3.83±0.16c	28.82±1.04c	24.15±0.61c	3.29±0.09b	60.09±1.40c
		N₂₁₀	1.93±0.12e	26.09±1.21d	19.97±0.75d	2.45±0.06d	50.45±3.24d
		N₃₁₅	2.50±0.10d	25.78±0.51d	21.48±0.64d	2.73±0.02c	52.49±2.06d
		N₄₂₀	4.43±0.23b	35.85±0.46b	28.28±0.91b	4.08±0.08a	72.65±1.19b
	陇东苜蓿 Longdong	N₂₁	1.92±0.04e	20.16±0.48e	14.56±1.01ef	1.89±0.09ef	38.53±2.59e
		N₁₀₅	1.19±0.29f	17.64±0.39f	13.16±0.48fg	1.71±0.11f	33.70±1.51f
		N₂₁₀	1.22±0.03f	21.25±1.10e	10.92±0.69g	1.67±0.03f	35.06±3.05ef
		N₃₁₅	1.76±0.09e	12.60±0.48g	10.92±0.84g	2.12±0.09e	27.41±0.96g
		N₄₂₀	2.21±0.02de	14.31±0.63g	15.82±0.29e	2.41±0.06d	34.75±1.51f

品种 Varieties	处理 Treatments	总根瘤数 Total nodule number	有效根瘤数 Effective nodule number	有效根瘤数/总根瘤数 Effective/total nodule number
LW6010	N₂₁	6.87±0.09a	5.53±0.09a	0.81±0.01a
	N₁₀₅	5.97±0.09b	4.53±0.03b	0.76±0.01b
	N₂₁₀	4.33±0.17d	3.43±0.12c	0.79±0.01a
	N₃₁₅	5.07±0.12c	3.63±0.07c	0.72±0.02c
	N₄₂₀	5.10±0.15c	3.70±0.12c	0.73±0.03c
陇东苜蓿 Longdong	N₂₁	3.63±0.09e	2.07±0.07d	0.57±0.01e
	N₁₀₅	2.97±0.15f	1.87±0.09d	0.63±0.00d
	N₂₁₀	2.90±0.21f	1.83±0.12d	0.63±0.01d
	N₃₁₅	3.07±0.15f	1.97±0.09d	0.64±0.01d
	N₄₂₀	3.17±0.15f	1.97±0.09d	0.62±0.00d