紫花苜蓿LACS基因家族成员鉴定及表达分析

doi:10.11686/cyxb2024206

摘要/Abstract

摘要：

长链脂酰辅酶A合成酶（LACS）基因家族是包含在酰基激活酶超家族中的一类，在脂肪酸合成代谢中具有重要的作用。基于紫花苜蓿基因组数据，采用生物信息学方法对紫花苜蓿LACS基因家族成员进行鉴定，构建系统发育树，进行理化性质、染色体定位、保守基序和基因结构、顺式作用原件及组织特异性表达分析，然后构建蛋白互作网络分析，通过qRT-PCR试验进行非生物胁迫表达分析。结果表明：在紫花苜蓿基因组中共鉴定得到10个MsLACS家族成员，分别位于5条染色体上；通过构建系统发育树，将MsLACS分为5支；保守基序分析发现12个不同的保守基序，Motif3构成了AMP保守结构域，MsLACS基因均含10~12个基序不等；基因结构分析发现，MsLACS基因结构大有不同，MsLACS基因的外显子数量为11~22个，所含内含子数量为0~3个不等，MsLACS1-1和MsLACS3不含内含子；MsLACS基因的启动子区域中主要有光反应元件、激素反应元件和非生物胁迫反应元件等；MsLACS基因在不同组织中表达不同，且具有明显的组织特异性；非生物胁迫表达分析表明：紫花苜蓿MsLACS基因对于干旱胁迫和盐胁迫响应水平整体较高，对冷胁迫响应水平偏低，表达量整体呈先升高后降低的起伏型，在叶片组织中偏高，根组织中较低；干旱和盐胁迫下，MsLACS基因在叶片中均高表达，胁迫时间段为6 h时，表达量水平整体达到最高；紫花苜蓿10个MsLACS基因共同互作，各蛋白与其他蛋白互作连线分别有18条，相互间有较强互作。研究结果可为探究紫花苜蓿中LACS基因表达以及胁迫育种提供一定研究基础。

关键词: 紫花苜蓿, 长链脂酰辅酶A合成酶（LACS）, 基因家族, 非生物胁迫, 表达

Abstract:

Members of the long-chain acyl-coenzyme A （CoA） synthetase （LACS） family， in the acyl-activating enzyme superfamily， play important roles in fatty acid anabolic metabolism. In this study， based on genomic data of Medicago sativa （alfalfa）， LACS gene family members were identified by bioinformatics methods， a phylogenetic tree was constructed， and the physicochemical properties of the putative proteins were determined. The chromosome localization， conserved motifs and gene structure， cis-acting elements， and tissue-specific expression patterns of the LACS genes were analyzed， and a protein-protein interaction （PPI） network was constructed. The transcript profiles of LACS genes under biotic stress were analyzed by qRT-PCR. The results showed that 10 MsLACS family members were present in the alfalfa genome， and were located on five chromosomes. In the phylogenetic tree， the 10 MsLACS were grouped into five branches. Motif3 constituted the conserved AMP-binding domain， and the alfalfa MsLACS genes contained 10-12 motifs. There were differences in gene structure among the 10 MsLACS genes， with the number of exons ranging from 11 to 22， and the number of introns ranging from 0 to 3. MsLACS1-1 and MsLACS3 had no introns. The promoter region of MsLACS contained light response elements， hormone response elements， and abiotic stress response elements. The transcript profiles of MsLACS genes differed among different tissues and showed obvious tissue specificity. Analyses of gene expression by qRT-PCR revealed higher transcript levels of MsLACS genes under drought stress and salt stress than under cold stress. Under cold stress， the transcript levels of MsLACS genes in alfalfa initially increased and then decreased， and were higher in the leaves than in the roots. Under drought and salt stress， MsLACS genes were highly expressed in leaves， with peak transcript levels at 6 h. The PPI network analysis showed that the 10 proteins encoded by MsLACS genes in alfalfa interacted with each other， with 18 lines of interaction among the proteins. These results provide a basis for further research on LACS genes in alfalfa and their applications in breeding for stress resistance.

Key words: Medicago sativa, long-chain acyl-coenzyme A （CoA） synthetase （LACS）, gene family, abiotic stress, expression

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图/表 11

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基因Gene	上游引物Forward primer （5′-3′）	下游引物Reverse primer （3′-5′）
MsLACS1-1	CATGCTGGGATGGCGTAAAAT	AGTGAAGCACTTTTTGCAACC
MsLACS1-2	TACCATGGGGTCAAAGCTCG	CCAACAGTACCAAGCATGCAC
MsLACS2	TTGGTTTCATACAGCCATGAAAAT	TTCTGTCGGGGACTACCACA
MsLACS3	CGGGGCTGTGGAGTTTGTTA	CATGACCCCCGATCTTCTCA
MsLACS5	GGAACGGGACCTTATCACTCC	GCAGTCAGTAAAAGACAGCTCAT
MsLACS8	ACTGGTGACATTGGGCGATT	CCAGAGACTGACGTGAAGCA
MsLACS9-2	TTCAGGGTTGTTTCAGGCGA	CAGCCGTGTCCAACAGATGA
Msactin	CAAAAGATGGCAGATGCTGAGGAT	CATGACACCAGTATGACGAGGTCG

基因Gene	上游引物Forward primer （5′-3′）	下游引物Reverse primer （3′-5′）
MsLACS1-1	CATGCTGGGATGGCGTAAAAT	AGTGAAGCACTTTTTGCAACC
MsLACS1-2	TACCATGGGGTCAAAGCTCG	CCAACAGTACCAAGCATGCAC
MsLACS2	TTGGTTTCATACAGCCATGAAAAT	TTCTGTCGGGGACTACCACA
MsLACS3	CGGGGCTGTGGAGTTTGTTA	CATGACCCCCGATCTTCTCA
MsLACS5	GGAACGGGACCTTATCACTCC	GCAGTCAGTAAAAGACAGCTCAT
MsLACS8	ACTGGTGACATTGGGCGATT	CCAGAGACTGACGTGAAGCA
MsLACS9-2	TTCAGGGTTGTTTCAGGCGA	CAGCCGTGTCCAACAGATGA
Msactin	CAAAAGATGGCAGATGCTGAGGAT	CATGACACCAGTATGACGAGGTCG

基因 Gene	基因ID号 Gene ID	氨基酸数 Number of amino acids （aa）	分子质量 Molecular mass （kD）	等电点pI	不稳定系数 Instability coefficient	脂溶性系数 Fat solubility coefficient	染色体定位 Chromosomal localization	亚细胞定位 Subcellular localization
MsLACS1-1	MsG0180004774.01.T01	610	68724.49	8.00	27.09	88.48	Chr1	叶绿体Chloroplast
MsLACS1-2	MsG0780041383.01.T01	597	66899.61	5.74	31.70	84.00	Chr7	细胞质Cytoplasm
MsLACS2	MsG0180001276.01.T02	654	73203.98	5.74	40.29	86.90	Chr1	细胞核Cell nucleus
MsLACS3	MsG0480023684.01.T01	584	65477.89	6.66	31.47	87.77	Chr4	细胞质Cytoplasm
MsLACS4	MsG0580024346.01.T01	662	73949.13	6.37	33.60	89.18	Chr5	细胞核Cell nucleus
MsLACS5	MsG0580024344.01.T01	744	83552.61	6.67	34.62	91.67	Chr5	细胞质Cytoplasm
MsLACS6	MsG0180005634.01.T01	692	76661.51	6.35	29.23	88.03	Chr1	细胞质Cytoplasm
MsLACS8	MsG0380016055.01.T02	727	79391.51	7.19	29.26	93.59	Chr3	叶绿体Chloroplast
MsLACS9-1	MsG0380016352.01.T01	860	94959.34	6.30	31.37	98.36	Chr3	叶绿体Chloroplast
MsLACS9-2	MsG0180001085.01.T01	697	76384.23	6.51	30.95	95.24	Chr1	叶绿体Chloroplast

基因 Gene	基因ID号 Gene ID	氨基酸数 Number of amino acids （aa）	分子质量 Molecular mass （kD）	等电点pI	不稳定系数 Instability coefficient	脂溶性系数 Fat solubility coefficient	染色体定位 Chromosomal localization	亚细胞定位 Subcellular localization
MsLACS1-1	MsG0180004774.01.T01	610	68724.49	8.00	27.09	88.48	Chr1	叶绿体Chloroplast
MsLACS1-2	MsG0780041383.01.T01	597	66899.61	5.74	31.70	84.00	Chr7	细胞质Cytoplasm
MsLACS2	MsG0180001276.01.T02	654	73203.98	5.74	40.29	86.90	Chr1	细胞核Cell nucleus
MsLACS3	MsG0480023684.01.T01	584	65477.89	6.66	31.47	87.77	Chr4	细胞质Cytoplasm
MsLACS4	MsG0580024346.01.T01	662	73949.13	6.37	33.60	89.18	Chr5	细胞核Cell nucleus
MsLACS5	MsG0580024344.01.T01	744	83552.61	6.67	34.62	91.67	Chr5	细胞质Cytoplasm
MsLACS6	MsG0180005634.01.T01	692	76661.51	6.35	29.23	88.03	Chr1	细胞质Cytoplasm
MsLACS8	MsG0380016055.01.T02	727	79391.51	7.19	29.26	93.59	Chr3	叶绿体Chloroplast
MsLACS9-1	MsG0380016352.01.T01	860	94959.34	6.30	31.37	98.36	Chr3	叶绿体Chloroplast
MsLACS9-2	MsG0180001085.01.T01	697	76384.23	6.51	30.95	95.24	Chr1	叶绿体Chloroplast

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